コムギ縞萎縮ウイルスの検出技術

• 担当機関: 北海道大学大学院
• 研究期間: 1997～2000
• 研究担当者: 磯貝雅道; 高橋葉子; 山名利一; 上田一郎; 竹内 徹; 畑谷達児; 堀崎敦史
• 発行年度: 2000
• 要約: コムギ縞萎縮ウイルスの外被タンパク質遺伝子を単離し、遺伝子組換え技術によって、大腸菌でウイルス抗原を大量に発現させ、抗体を作成した。作成した抗体によるエライザ法で、コムギからウイルスを検出できる。
• 背景・ねらい: コムギ縞萎縮ウイルス(WYMV)は，コムギの根に寄生する土壌菌Polymyxa graminisによって媒介される土壌伝染性のウイルスである。現在の主要品種「ホクシン」は，コムギ縞萎縮病に弱く，「ホクシン」の作付増加に伴い，本ウイルスの分布が拡大している。そこで，道内における発生実態調査および抵抗性系統の早期選抜のために，遺伝子工学的手法を利用して，コムギ縞萎縮ウイルスの実用的な検出技術を確立する。

成果の内容・特徴

1. 伊達市「ホクシン」の病葉から，コムギ縞萎縮ウイルスのRNAを抽出し，RT-PCR法によって外被タンパク質(CP)遺伝子を単離した。
   
2. 単離したCP遺伝子を大腸菌に組み込んだところ，コムギ縞萎縮ウイルスの外被タンパク質(CP)を大量に発現させることができた(図２)。大量発現したCPをカラムで精製して，抗血清作成のための抗原を得た。
   
3. 得られた抗原をウサギに免疫し，抗血清(抗体)を作成した。作成した抗体を用いたエライザ法によって，病葉の10,000倍希釈液からもウイルスを検出できる(図３)。
   
4. エライザによるコムギからのウイルス検出部位を検討した結果，最上位展開葉では吸光値が低下し(図４)，葉身部位では先端で吸光値が高まった。したがって，エライザ検定は，最上位展開葉の1枚下の葉の先端部を検定用サンプルとする。
   

成果の活用面・留意点

1. エライザ法は，発生実態調査，品種系統の抵抗性検定など，コムギ縞萎縮ウイルスの検出に幅広く活用できる。
   

平成12年度北海道農業試験会議成績会議における課題名及び区分
課題名：コムギ縞萎縮ウイルスの検出技術の確立(指導参考)

• カテゴリ: 萎縮病 抵抗性 抵抗性検定 品種