DNA制限酵素断片長多型（RFLP）によるスギのクローン識別

• 担当機関: 森林総合研究所
• 研究担当者: 生物機能開発部遺伝子発現研究室 向井 譲遺伝分析研究室 津村義彦; 村井正文
• 発行年度: 1992
• 背景・ねらい: スギはわが国で最も重要な樹種の一つであり，精英樹をはじめ多くの育種母材が収集されている。また，アイソザイム分析などを用いて遺伝マーカーが多数探索されている。しかし，品種識別や連鎖解析などを行うにはさらに多くの遺伝マーカーが必要である。そこで，多数の遺伝マーカーが得られるDNA制限酵素断片長多型（RFLP）分析を利用してスギのクローン識別を試み，林木の遺伝研究への適用を計った。
• 成果の内容・特徴: RFLP分析を利用してスギのクローン識別や連鎖解析を行うため，大腸菌プラスミドを用いてクローン化したスギのDNA断片の中からオギノヤマスギ，クモドオシ，G-5及びミドリスギの4個体の間でRFLPを示すクローン化DNA断片（プローブ）を探索した。4種類の制限酵素（EcoRV，EcoRI，BamHI，HindⅢ）で切断した上記4個体のゲノムDNAを電気泳動で分離後ナイロン膜に写し取り，サザン・ハイブリダイゼーションを行い，32Pで標識したプローブと相補的なゲノムDNA断片をオートラジオグラフィーで検出した（図1）。; 所内に植栽されているスギ精英樹（一部その他の育種母材を含む）54個体を用いて13個のプローブと上記4種類の制限酵素のうち各プローブでRFLPの検出に適した1種類を組み合わせてRFLP分析を行った。その結果，9個のプローブについて解析可能なオートラジオグラムを得た（図2）。9個のプローブで得た結果を総合すると，全体の87％（47個体）が別クローンとして識別できた。また，今回用いた個体のアイソザイムの遺伝子型を既報より引用し，比較した結果，別クローンとして識別できた個体はわずか38.5％であった（図3）。RFLP分析で識別できない3組（7個体）のうち，2組（5個体）はアイソザイム分析でも識別できなかった。また，うち1組（3個体）は全て九州の挿し木（メアサ）林で選抜されたものであるため，RFLP分析でもアイソザイム分析でも識別できないこれら3個体は極めて近い類縁関係にあると示唆された。以上の結果，RFLP分析は有効なクローン識別の手段であることが明らかにされた。
• カテゴリ: 育種 挿し木 品種