フローサイトメーターによるブドウの倍数性の簡易判定法

• 担当機関: 山梨県果樹試験場
• 研究期間: 1988～1997
• 研究担当者: 近藤真理; 三宅正則; 別所英男
• 発行年度: 1998
• 要約: ブドウの倍数性は、フローサイトメーターで相対DNA 量を測定することによって簡易に判定できる。
• 背景・ねらい: 大粒ブドウの新品種育成に対する要望は非常に大きいが、交雑親の主流となる四倍体品種は巨峰群に偏っており、育種の母本としての利用が限られている。そこで、コルヒチンによって二倍体の染色体数を倍に増やし、四倍体系統をつくる試みがなされてきた。 従来、コルヒチン処理した個体の倍数性の確認は、顕微鏡による染色体数の調査によって行われてきたが、この方法には熟練と長い時間を要する。そこで、山梨県酪農試験場の協力を得て、三倍体カンキツの簡易選抜法として報告されている（四国農業研究成果情報、1996）フローサイトメーターを用いた倍数性の判定法について検討した。

成果の内容・特徴

1. 　フローサイトメーターでは、各細胞の染色体を蛍光色素で染色し、蛍光の強さで DNA　量を測定する。測定手順は、幼葉約 0.1ｇ を核解離用液に浸してカミソリで細かく切断し、ろ過した後、蛍光色素の入った染色液を加えてフローサイトメーターにセットする。
   
2. 　既存のブドウ 24 品種・１系統（表１）について、フローサイトメーターにより相対　DNA 量を測定した。その結果、倍数性によって異なる DNA ヒストグラムが得られ（図１）、二倍体、三倍体、四倍体の識別が可能であった。
   
3. 　次に、平成３年度にガラス器内で培養中の「ピッテロ・ビアンコ」の茎端をコルヒチン処理して得た 36 個体について倍数性を調査したところ、四倍体のほかにキメラ（二倍体と四倍体の細胞の混在）と考えられる個体も認められた（図２）。
   
4. 　フローサイトメーターによる倍数性の判定法は、今までの方法と比べると、非常に簡易で短時間（１サンプル５分程度）で測定できる。
   

成果の活用面・留意点

1. 　この手法の利用によって、コルヒチンを用いた四倍体系統の育成が効率化される。
   
2. 　ブドウ以外の果樹にも応用が期待される。
   

• カテゴリ: 育種 新品種育成 乳牛 品種 ぶどう その他のかんきつ