いちごのウイルスフリー苗生産のためのウイルス検査法

• 担当機関: 道立中央農試
• 研究期間: 2005～2007
• 研究担当者: 佐々木純; 古田和義（北海三共（株））; 竹内徹
• 発行年度: 2008
• 要約: 作製したイチゴマイルドイエローエッジウイルス（SMYEV)抗体によりSMYEVを検出できる。また、作製したLAMPプライマーを用いてSMYEV、イチゴモットルウイルス（SMoV)、イチゴベインバンディングウイルス（SVBV）を検出できる。
• キーワード: いちご、ウイルス、ELISA法、LAMP法

背景・ねらい

栄養繁殖性であるいちごは、ウイルスに感染すると、生産性と品質が著しく低下するためウイルスフリー苗による栽培が不可欠であるが、その検査は経費、作業時間、検査者の技術といった多くの問題を抱えている。本試験では、現地で多く発生しているイチゴマイルドイエローエッジウイルス（SMYEV)のELISA法(酵素結合抗体法)と母株のウイルス高感度検査法として主要なウイルスであるSMYEV、イチゴモットルウイルス（SMoV)、イチゴベインバンディングウイルス（SVBV）のRT-LAMP法（遺伝子診断法）を確立し、いちごのウイルスフリー苗の安定生産に寄与する。

成果の内容・特徴

1. いちごの現地サンプルから高い頻度で検出されているSMYEVについて大腸菌発現系 でSMYEV-外被タンパク質遺伝子を発現させ、ウサギに免疫して特異的なSMYEVポリクローナル抗体を作製できる
2. 作製したSMYEV抗体は、DAS-ELISA法により罹病葉の生体重の100 ～1000倍希釈までSMYEVを検出が可能である（表1）。
3. 病害虫診断試験で持ち込まれたサンプルについてELISA法によりSMYEV検出が可能である（表２）。
4. いちごの主要なウイルスであるSMoV、SMYEV、SVBVの北海道分離株について遺伝子配列を明らかにしてプライマーを設計・選抜した特異性の高いプライマー（表３）を用いて、いちご罹病葉の粗抽出液からLAMP法によりSMYEVは罹病葉から高感度に検出することができる（表４）。
5. SMYEVのELISA法は多検体検定が可能で高価な機器を必要としないため、苗の検査や病害虫診断、生産現場での検査に利用が可能である。またSMYEV、SMoV、SVBVのLAMP法は、ウイルス遺伝子の抽出作業が煩雑で労力とコストがかかるPCR法に代わりウイルスフリー苗の母株のウイルスフリー検査に利用が可能である。

成果の活用面・留意点

1. SMYEV、SMoV、SVBVのLAMP法は母株のウイルスフリー検査に利用する。SMYEVのELISA法はランナー苗のウイルスフリー検査や、現地圃場のウイルス検査および病害虫診断に利用する。

平成２０年度北海道農業試験会議（成績会議）における課題名および区分
「いちごのウイルスフリー苗生産のためのウイルス検査法」（指導参考）

• カテゴリ: いちご 害虫 コスト 繁殖性改善