32. ブタ骨格筋における，ミオシン重鎖アイソフォームの発現様式解析法

• 担当機関: 畜産試験場
• 研究期間: 1998～2000
• 研究担当者: 室谷進; 千國幸一; 中島郁世; 田邉亮一
• 発行年度: 1998
• 要約: ブタ骨格筋には４種類のミオシン重鎖(MyHC)アイソフォームが存在する。ブタMyHC-2xの部分cDNA配列を新たに決定し、決定した配列を基に、RT-PCR法を用いた、４種類のMyHCアイソフォームの量比を分析する方法を開発している。MyHCアイソフォーム発現様式は、ブタの筋肉によって異なる。
• 背景・ねらい: ミオシンは、骨格筋の筋原線維タンパク質重量の約４３％を占める、筋肉内の主要タンパク質である。成熟した家畜の骨格筋には、分子構造が少しずつ異なる４種類のミオシン重鎖(MyHC)アイソフォームが存在する(MyHC-2a，-2b，-2x，-slow)。この各アイソフォームがどの様な割合で存在しているかという、MyHCアイソフォームの発現様式は、食肉の品質、特に食感（テクスチャー）に影響を及ぼすのではないかと考えられている。しかし、MyHCアイソフォームの発現様式の分析法が無いことが研究上のネックになっていた。; そこで、RT-PCR法によって、ブタのMyHCアイソフォーム発現様式を解析する方法を開発することを目的に研究を行った。さらに、開発した手法を用いて、ブタの筋肉によるMyHCアイソフォーム発現様式に違いがあるかを検討した。

成果の内容・特徴

1. ブタMyHC-2xアイソフォームcDNAのＮ末端部分配列(399
   bp)を新たに決定した。決定した配列を基に各アイソフォームに特異的なPCRプライマーを合成した（図１）。これらのプライマーを用いて、テンプレートに含まれる各MyHCアイソフォームDNAの量比に対応したPCR産物が得られるようなマルチプレックスPCR法を開発した。筋肉中のRNAから合成したcDNAをテンプレートとして上記のPCR法を行うことによって（RT-PCR)、筋肉中の各MyHCアイソフォームの量比を推定することが可能となった。
   
2. ブタのMyHCアイソフォーム発現様式は筋肉によって大きく異なっていた。すなわち、胸最長筋はMyHC-2xが60%、MyHC-2bが30%、MyHC-2aが5%、MyHC-slowが5%であった。半棘筋においては、同、40,
   0, 25, 35%であった。半腱様筋においては、同、30,
   60, 5, 5％であった。舌筋では、MyHC-2aが50%であった。一方、横隔膜では、MyHC-slowが50%であった。半棘筋、舌筋、横隔膜にはMyHC-2bの発現がみられなかった（図２）。
   

• 成果の活用面・留意点: 本研究により初めて、4種類すべてのMyHCアイソフォームの量比を分析できるようになった。この手法はMyHCアイソフォームと食肉の品質の関連を明らかにする研究だけでなく、家畜組織学、家畜生理学の分野にも有効な手段となると思われる。
• カテゴリ: 豚