魚類ビブリオ病起因Vibrio anguillarumのＤＮＡプローブ法による迅速同定技術の開発

• 研究期間: 1990～1993
• 研究担当者: :伊藤博哉; 関崎勉; 寺門誠致; 内田郁夫
• 発行年度: 1993
• 要約: Vibrio angillarumに特異的なDNA断片を同定するとともに，非放射性物質標識DNAプロープを用いたコロニーハイブリダイゼーション法による本菌の迅速同定技術を開発した。
• 背景・ねらい: Vibrio anguillarumを起因菌とするビブリオ病は，細菌性魚病の中でも古く; から知られている疾病の一つである。本病の養殖産業界に与える被害は甚大; であり，その被害を最小限にとどめるためには，本病の迅速かつ信頼性の高; い診断法が必要である。しかし，本病は症状からは他の細菌性感染症と区別; し難く，診断の困難な魚類細菌病の一つとなっている。本病診断のために，; 従来は細菌学的性状検査による分離菌株の同定が実施されてきた。しかし，; 分離菌株の菌種同定には，多くの労力と時間を要するため，従来の方法に代; わる簡便・迅速かつ特異的な同定法が望まれている。そこで，近年病原細菌; の新しい同定法として注目されている，遺伝子の特異的塩基配列を利用した; V.anguillarumの迅速同定法について検討した。

成果の内容・特徴

1. 遺伝子ライブラリーから，V. anguillarumに特異的なDNA断片（１．６
   kb及び１．０kb)２つを選び，非放射性物質（ジゴキシゲニン）で標
   識したプローブ（それぞれVANG-306及びVANG-366）を作製
   した。
   
2. ２つのプローブを用いたコロニーハイブリダイゼーションでは，いずれも
   V.anguillarumにのみ特異的に反応し，他の主要な急病細菌及び他のビブリ
   オ属菌とは反応しなかった
   (表１)。
   特に，V.anguillarumと近縁なV.ordaliiに対しても反応しなかった
   （図１）。
   
3. １コロニー程度の培養菌があれば，翌日の午前中までには菌種同定が可能
   であり，従来の一般細菌学的性状検査よりも迅速であると考えられた。
   

• 成果の活用面・留意点: 本法は，非放射性物質であるジゴキシゲニンで標識したプローブを使用する; ので，ラジオアイソトープを使用できない一般の検査室でも実施可能である。; また，少量の培養菌があれば，翌日には結果が判明するので，V.anguillarumの; 簡易迅速同定法の一つとして活用できる。