アフリカ豚コレラウイルス感染豚からのＰＣＲ法によるウイルス遺伝子の検出

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1993～1995
• 発行年度: 1995
• 要約: アフリカ豚コレラウイルス（ＡＳＦＶ）接種豚の血液並びに各種拭い液からＰＣＲ法を用いてウイルス遺伝子の検出を実施した。ＡＳＦＶに特異的なチミジンキナーゼ（ＴＫ）の遺伝子の領域からプライマーを選択した結果、目的のＰＣＲ産物を上記材料から確認した。
• 背景・ねらい: アフリカ豚コレラ（ＡＳＦ）は，国際獣疫事務局（ＯＩＥ）が最重要疾病として指定している豚の海外悪性伝染病である。現在，わが国にはＡＳＦの発生はないが，有効なワクチンがないため本病が侵入すると国内養豚業は壊滅的被害を受ける恐れがある。しかも，近年本病の病勢はウイルスの病原性の変化により多様化する傾向がありその防疫は一段と困難になっている。とくに、不顕性に経過する感染豚の感染初期の診断や汚染畜産物の摘発は現行の国際標準法では不充分である。そこで、不顕性感染豚並びに汚染畜産物の摘発手法を確立する目的でＰＣＲ法を用いた早期迅速診断法の開発を試み下記の成果を得た。

成果の内容・特徴

1. アフリカ豚コレラウイルス（ＡＳＦ）のチミジンキナーゼ（ＴＫ）をコードする遺伝子には本ウイルスに特異な領域が存在する。この領域に対するプライマーを用いてＰＣＲを試みた結果、目的とする遺伝子の増幅はＡＳＦＶでのみ確認され、豚ヘルペス１型（ＰＲＶ）、豚痘ウイルス（ＳＰＶ）及び非感染細胞ではその増幅は認められなかった（図１）。
   
2. ＡＳＦＶ Lisbon'60株接種豚から経時的に採材した白血球材料からＤＮＡを抽出してＰＣＲ法でウイルス遺伝子の検出を実施したところ、ウイルス接種１日目から目的とするＰＣＲ産物が確認された（図２）。
   
3. 同時にウイルス感染豚の鼻腔、咽頭並びに直腸拭い液からＤＮＡを抽出して本ＰＣＲ法を実施したところ、ウイルス感染後遅くとも２日目から目的のウイルス遺伝子が確認され、ウイルスの排泄は極めて早期に起こっていることが判明した。
   
4. さらに、４週間の接種豚観察期間中すべての材料からウイルス遺伝子が検出されたことから、抗体産生後も長期にわたりウイルスが排泄されていることが確認された。（図３）。
   
5. 血液並びに各種拭い液から培養細胞を用いてウイルス分離を試みた結果（表1）、血液を材料とした場合にはＰＣＲ法による遺伝子検出法とウイルス分離法では感度の点で大きな差は認められなかった。しかし、拭い液を材料とした場合には、ＰＣＲ法による遺伝子検出法がウイルス分離法よりも極めて優れていた。
   

成果の活用面・留意点

ＡＳＦＶのＴＫ遺伝子を標的とするＰＣＲ法は、特異性、検出感度及び迅速性の点で従来のウイルス検出法に比べて極めて優れていることが判明した。血液材料からの検出が可能であることから、検疫時及び流行地における診断等に広く応用できると考えられる。しかし、畜産物中の汚染の摘発のためにはさらに検討する必要がある。

• カテゴリ: 豚