ＬＰＳ（リポ多糖）誘導性遺伝子群の検索

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1994～1996
• 発行年度: 1995
• 要約: Differential Display法を用い、ＬＰＳで誘導されてくる遺伝子の大量解析を行った。免疫系に関与すると言われている既知の遺伝子群の他に新規の遺伝子クロ－ンが多数得られた。これらの遺伝子の中に家畜の生体防御能の強化に役立つ遺伝子が存在する可能性がある。
• 背景・ねらい: 哺乳類の細胞では約10万種類の遺伝子が存在するが、個々の細胞ではその15％くらいが発現していると考えられる。どの遺伝子が発現するかは、臓器、細胞の種類（T cell、B cell、マクロファ－ジ）刺激の有無（感染、環境ストレス）など様々な条件によって変化する。Differential Display法は ＰＣＲ法を利用した方法で、異なる状態にある細胞どうしの遺伝子発現を一度に比較するものである。今回は腹腔マクロファ－ジにおけるＬＰＳ誘導性遺伝子のm-RNA 3'領域を大量にクロ－ニングした後、遺伝子配列の解析を行った。

成果の内容・特徴

1. ＬＰＳ添加8時間後のmRNAを回収し、Differential Display法を行った。バンドの総数は3481本あり、そのうちＬＰＳ添加時のみ発現するバンドは103本であった（全泳動パタ－ンのうち一部のみ図示、図１）。
   
2. それらの全てのシ－ケンスを決定し、遺伝子配列を解析したところ、既知の遺伝子が43コあり、55コは既知の遺伝子とはホモロジ－がない遺伝子配列であった（表１）。
   
3. ホモロジ－が認められなかった遺伝子のうち、ノザンブロット法で3クロ－ン（図２）、ＲＴ－ ＰＣＲ法で4クロ－ンの遺伝子がＬＰＳ誘導性遺伝子であることを確認した（図３）。
   

成果の活用面・留意点

ＬＰＳ誘導性遺伝子群の中に、マクロファ－ジ機能の向上、免疫系の強化を狙える遺伝子が存在している可能性がある。またDifferential Display法を用いて病原因子誘導性遺伝子の検索、病態時に増減する遺伝子の検索、抗病性家畜と非抗病性家畜での遺伝子発現の比較を細胞レベルで行うことが可能となった。