ＰＣＲ法によるMycobacterium aviumとM.intracellulareの同定

• 担当機関: 家畜衛生試験場北海道支場臨床微生物研究室
• 発行年度: 1996
• 要約: 簡易抽出法を用いて抗酸菌よりテンプレートＤＮＡを抽出し，１組のプライマーでＰＣＲを実施する事により，M.aviumからは３００ｂｐあるいは１７７６ｂｐの産物がえられ，M.intracellulareからは１０７０ｂｐの増幅産物が得られる。
• 要約(英語): When the template DNAs that were extracted from mycobacteria using the commercial kits were amplified by non-multiplex PCR, Mycobacterium avium possessed 300bp or 1776bp products and M.intracellulare possessed the novel band, 1070bp product. (Hokkaido Research Station, Lab. of Clinical Microbiology TEL [phone])
• 背景・ねらい: Mycobacterium avium complexと呼ばれる菌群は，トリの結核，ヒトの非定型抗酸菌症及びブタの抗酸菌症を引き起こすM.avium subsp.aviumとM.avium subsp.silvaticum，またウシのヨ－ネ病を引き起こすヨ－ネ菌（M.avium subsp.paratuberculosis），さらにヒトの抗酸菌症を引き起こすM.intracellulare，またこれらの何れにも属さない菌株で構成されいる。各菌種は生化学的および血清学的性状により鑑別されてきたが，判定に２～８週間を要するために迅速化が望まれていた。また，分子遺伝学的手法を応用するために抗酸菌よりＤＮＡ抽出する方法は煩雑であり，簡便な抽出法の開発も望まれていた。; そこで，培地上のコロニーからテンプレートＤＮＡを簡易に抽出する方法を検討した。さらに，M.avium complex各菌種の迅速簡便な同定法を検討した。

成果の内容・特徴

1. ３００ｂｐ以下のＤＮＡ増幅では煮沸法を用いても十分であるが，１ｋｂｐ以上のＤＮＡ増幅を必要とする場合ではＢＩＯ－ＲＡＤ社のインスタジーンマトリックスを用いた抽出法（インスタジーン法）から良好な成績が得られた（図１）
2. 培地上に発育した抗酸菌参照株のコロニーより，インスタジーン法を用いてテンプレートＤＮＡを抽出し，１組のプライマーでＰＣＲを実施した。その結果，M.aviumからは３００ｂｐあるいは１７７６ｂｐの産物がえられ，他方M.intracellulareからは１０７０ｂｐの増幅産物が得られ，それぞれの同定が可能であった。（図２）。
   
3. 野外分離株において本法の有用性が示された（表１）。
   

成果の活用面・留意点

　本同定法は培地上に発育した抗酸菌を対象としたものである。

• カテゴリ: 豚