ＰＣＲ法によるアフラトキシン関連遺伝子の検出

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1995～1997
• 発行年度: 1997
• 要約: Aspergillus属カビのうちAspergillus parasiticusのアフラトキシン産生に関与する酵素遺伝子の存在を高感度で検出するＰＣＲ法を開発した。
• 要約(英語): Since genes regulating of aflatoxin biosynthesis have been identified, we have developed several of these gene probes using polymease chain reaction.; These gene probes could be used to monitor to fungal growth (especially Aspergillus parasiticus) and aflatoxin formation .(Lab. of Carcinogenicity, Department of Feed Safety, TEL [phone])
• 背景・ねらい: アフラトキシンはAspergillus属の一部のカビによって作られるカビ毒で，動物に対して強い急性毒性を示すとともに自然界で最も強力な発がん物質として恐れられている。東南アジアからアフリカにかけてのヒト肝癌多発地帯が高温多湿で穀物などのアフラトキシン汚染と一致することから，アフラトキシンは人間の肝臓癌の原因物質のひとつと考えられている。アフラトキシンの検出は抗体などの利用で可能になっているが，産生糸状菌の分析は容易ではない。そこで，アフラトキシン汚染防除対策の確立に寄与するため，産生菌Aspergillus parasiticusを高感度に検出できるＰＣＲ法を開発した。

成果の内容・特徴

（図１）

1. すでに報告されているAspergillus parasiticusの４種のアフラトキシン関連酵素遺伝子の塩基配列をもとに，それぞれ２組のＰＣＲ反応のためのプライマー分子を設計した（図２）。
   
2. 細胞壁の存在のため操作が煩雑で長時間を要する糸状菌のＤＮＡ分離条件を検討し，メタル・キサントゲン酸塩を用いた抽出法（Jhingan,1992）が分離効率が高いことを明らかにした。
   
3. 検討したAspergillus属の糸状菌（A.parasiticus,A.oryzae,A.sojae,A.flavus）のうち，Aspergillus parasticusのみに，目的遺伝子の特異的増幅が確認された（図３）。
   

成果の活用面・留意点

　 Aspergillus parasticusの遺伝子診断のために，４種のアフラトキシン関連酵素の遺伝子塩基配列をもとにＰＣＲ反応のためのプライマー分子を設計した。本プライマーはAspergillus属の糸状菌のうちでA. parasticusに特異性が高く，研究室保有の他のAspergillus属の糸状菌では明確なＤＮＡの増幅は認められなかった。４種のプライマー対を用いたＰＣＲ法によりAspergillus parasticusの迅速な検出・同定が可能であり，Aspergillus parasticusによるアフラトキシン汚染の防除を進める上で有用であると考えられる。

• カテゴリ: 病害虫 防除