豚水胞病ウイルス(SVDV)の病原性遺伝子の解析

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1998～2000
• 発行年度: 1998
• 要約: 豚水胞病ウイルスの病原性遺伝子を病原性及び非病原性株の感染性cDNAクローンを用いたキメラウイルス及び部位特異変異ウイルスを作出することにより解析した。この結果，構造蛋白VP1の１アミノ酸及び2Aプロテアーゼの１アミノ酸が病原性に関与することが明らかになった。
• 要約(英語): A series of recombinant viruses were constructed using infectious cDNA clones of the virulent J1'73, and the avirulent H/3'76 strains of swine vesicular disease virus to identify the genetic determinants of pathogenicity. These determinants could be mapped to the region between nucleotides (nt) 2233 and 3368 corresponding to the C terminus of VP3, the whole of VP1 and the N terminus of 2A. In this region, there are eight nucleotide differences leading to amino acid changes between the two strains. To map more precisely the determinants of pathogenicity, site-directed mutagenesis was performed to produce the mutant viruses. From the results of animal experiments with two mutant viruses, we concluded that two amino acids (VP1-132 and 2A-20), which were shown as plaque size determinants in the last study, are also genetic determinants of pathogenicity.; ( Lab. of Diagnosis, Department of Exotic Disease, TEL [phone]); Reference:; Kanno, T., et al. : Mapping the genetic determinants of pathogenicity and plaque phenotype in swine vesicular disease virus. J. Virol., 73 : 2710-2716 (1999)
• 背景・ねらい: 豚水胞病ウイルス（SVDV）病原性J1'73株はIBRS-2細胞にて大型のプラックを形成し，感染試験において豚の四肢，鼻鏡及び舌に水疱病変を形成する。一方，非病原性H/3'76株は小型のプラックを形成し，感染試験において水疱形成が認められない。これまで，in; vitroでの生物学的マーカーであるプラックサイズの規定遺伝子の解析を行い，構造蛋白VP1-132のアミノ酸とウイルスプロテアーゼ2A-20のアミノ酸が関与することを確認した。今回は，プラックサイズ規定遺伝子の解析のため作出した種々のキメラウイルス及び部位特異変異ウイルスの豚感染試験を行うことにより，本ウイルスの豚への病原性を規定する遺伝子部位の解析を行った。

成果の内容・特徴

1. 病原性J1'73株の感染性cDNAクローン（pSVLSJ1）及び非病原性H/3'76株の感染性cDNAクローン（pSVLS00）を互いに組換え，Cos-7細胞にトランスフェクトすることにより得られた６株のキメラウイルスの豚感染試験を行い，その病原性を確認した。病原性のコントロールとしては両株の感染性cDNAクローン由来ウイルス（vSVSLJ1及びvSVLS00）を用いた。その結果，プラックサイズと同様に構造蛋白VP3の一部，VP1及び非構造蛋白2Aの一部を含むBst1107I-BssHII領域が豚への病原性にも関与することが確認された（図1）。
2. 本領域には，８カ所のアミノ酸相違があり，その中で構造蛋白VP1-132と2Aプロテアーゼ2A-20の部位の２アミノ酸がプラックサイズを規定することを確認した。そこで，両部位を非病原性株から病原性株へ，あるいは病原性株から非病原性株のアミノ酸に変異させた部位特異変異ウイルスvSVLS104/201MJ1及びvSVLS104/201M00の豚感染試験を行った。その結果，vSVLS104/201MJ1接種豚全頭に水疱の形成が確認され，vSVLS104/201M00接種豚には水疱形成が認められなかった（図1）。
3. 以上の成績から，構造蛋白VP1の１アミノ酸（VP1-132）とウイルスプロテアーゼ2Aの１アミノ酸（2A-20）はin
   vitroでの生物学的マーカーであるプラックサイズと同様に豚への病原性にも関与することが明らかになった。

成果の活用面・留意点

SVDVの病原性関与遺伝子が特定され，この成績は本病の防除法の開発に活用される。

• カテゴリ: 病害虫 豚 防除