牛アポリポ蛋白質ＥのELISAの開発と血中動態および性状の解析

• 担当機関: （独）農業・生物系特定産業技術研究機構 動物衛生研究所
• 研究期間: 2002～2004
• 研究担当者: 宮本 亨; 高橋雄治; 大橋 傳
• 発行年度: 2004
• 要約: 牛血液中のアポＥを同定しELISAによる定量法を確立した。さらに絶食や泌乳により血中アポＥ濃度が増加すること、ヒトやラット等と異なり、ゲルろ過でHDL領域に溶出されるアポＥはHDLの構成成分ではなく、遊離型であることが明らかになった。
• キーワード: ウシ、脂質代謝、アポリポ蛋白質、アポＥ
• 背景・ねらい: アポリポ蛋白質（アポ蛋白）は血中の脂質輸送に不可欠であり、その血中濃度は生体の生理的、病的状態を反映している。特に脂質代謝が亢進する乳牛の周産期には大きな変動を示し、周産期疾病の診断や予防に有効であることが明らかとなっている。ヒトにおいてアポリポ蛋白質Ｅ(アポＥ)は各臓器・細胞のレセプターに対するリガンドとして機能し、脂質代謝に重要な役割を持ち、特に高脂血症の診断指標として利用されている。また、超低密度リポ蛋白質やカイロミクロン、高密度リポ蛋白質（HDL）に分布していることが知られている。しかし、牛においてはほとんど情報がなく、本研究は牛アポEの動態および性状を解析することを目的とする。
• 成果の内容・特徴: 1.; 牛の血液中に存在するアポＥをＮ末アミノ酸配列により同定した。; 2.; 牛アポＥに対する抗血清を作出し、ビオチンーアビジン系のサンドイッチELISAによる定量法を確立した。; 3.; 3日間の絶食により血中アポＥ濃度が有意に増加し(p0.05)、再給餌3日後には絶食前の濃度に回復した（図１）。; 4.; 乳牛の血中アポＥ濃度は乾乳期に比較すると泌乳期は有意に増加した(P0.05)。泌乳初期、中期、後期間では差はなかった（図２）。; 5.; 泌乳牛では乾乳牛に比べ、ゲルろ過でHDL領域に位置するアポＥが増加した（図３）。アガロースゲル電気泳動の結果、ラットではHDLに相当するα位にアポＥが大量に検出されるが、牛では検出されなかった（図４）。泌乳牛HDL領域から分離したアポＥ含有粒子は、コレステロールをほとんど含まなかったことから、泌乳牛血漿にはラットと異なり、リポ蛋白質に結合していない遊離のアポＥが存在することが判明した。; 6.; 牛初代培養肝細胞が分泌するリポ蛋白質をゲルろ過あるいは超遠心で分画しアポＥの分布を調べたところ、泌乳牛血漿と同様であった。さらに分離したアポＥ含有粒子にはアポＥ以外のアポ蛋白がほとんど含まれていなかった。これらの結果より、牛アポＥは肝細胞から他のアポ蛋白や脂質を含まない形で分泌されることが示唆された。これはリポ蛋白質として他のアポ蛋白や脂質と一緒に分泌されるヒトやラットと異なる牛アポＥの特質であるといえる。
• 成果の活用面・留意点: 1.; 牛アポＥの特質が明らかとなり、定量法が確立された。本成果は脂質代謝異常の発生機序解明や、周産期疾病診断法への応用への可能性を示唆した。
• カテゴリ: 乳牛 輸送