メロンＡＣＣ合成酵素プロモー領域の単離

• 担当機関: 島根県農業試験場
• 研究期間: 1998～1999
• 研究担当者: 近重克幸; 杉山万里
• 発行年度: 1998
• 要約: メロン成熟果実由来のACC合成酵素遺伝子の塩基配列を基に、その5'上流域を単離した。単離したフラグメントをGUS遺伝子上流に配したベクターを構築し、トランジェントアッセイによりプロモーター活性を有することを認めた。
• 背景・ねらい: 成熟した果実で特異的に遺伝子の発現を制御するプロモーターを獲得するために、メロン成熟果実由来の1-アミノシクロプロパン-1-カルボン酸（ACC）合成酵素遺伝子の5'上流域を単離し、そのプロモーター活性を検討する。

成果の内容・特徴

1. メロン‘おくに’の全DNAをCTAB法で抽出し、制限酵素で消化後、それぞれセルフライゲーションを行った。DDBJデータベースのメロン成熟果実由来ACC合成酵素遺伝子の塩基配列を基にプライマーを設計し、セルフライゲーションしたメロンDNAをテンプレートにインバースPCRを行った。EcoRIで消化したテンプレートにより約1.6kbpのPCR産物が得られた。このフラグメントをシーケンスベクターにクローニングし、塩基配列を決定した（図１）。
   
2. 導入ベクターpBI221をもとに、CaMV35Sプロモーターを除いたベクターと、CaMV35Sプロモーター部位にACC合成酵素遺伝子のプロモーター領域を組み込んだベクターを作成し、パーティクルガン（株式会社タナカ　ガス圧5kg/cm²、距離55mm）でメロン、キュウリの果実へ導入した。15時間15℃でインキュベート後β-グルクロニダーゼ（GUS）活性を調べたところ、CaMV35Sプロモーターを除いたベクターではGUS活性をまったく認めなかったが、ACC合成酵素プロモーターではCaMV35Sプロモーターと同程度の発現を確認した（図２）。
   

成果の活用面・留意点

1. 単離した5'上流域をプロモーターとして遺伝子組換えに利用した場合、特異的な発現制御が期待できる。
   

• カテゴリ: きゅうり データベース メロン