ホウレンソウのプロトプラストからの植物体再生

• 担当機関: 岐阜県農業総合研究センター
• 研究期間: 1996～1998
• 発行年度: 1996
• 要約: ホウレンソウ品種「キングオブデンマーク」の子葉から単離したプロトプラストを、ショ糖のみで浸透圧を調整した2,4-DとBAPを含む1/2MS液体培地で培養してカルスを誘導し、IBAとGA3 を含む1/2MS寒天培地に継代することにより植物体再生が可能である。
• 背景・ねらい: 植物への遺伝子導入に用いられるアグロバクテリウム感染法は、その宿主特異性から植物種によっては遺伝子導入が困難なものがあり、また感染後には除菌のための抗生物質処理を必要とするため、形質転換体獲得率は必ずしも高くないのが現状である。これらの点を解決する方法として、遺伝的修飾が容易なプロトプラストに直接遺伝子を導入するエレクトロポーレーション法とポリカチオン法を用いることが有効と考えられる。そこで、これらの方法によるホウレンソウへの遺伝子導入のための省力的なプロトプラスト培養法を開発する。

成果の内容・特徴

1. 材料には、ホウレンソウの種子を濃硫酸で30分間、室温で処理し、流水で十分に洗浄した後、1/2MS培地に無菌播種して養成した発芽後10日程度の子葉を用いる。
   
2. プロトプラスト単離には、セルラーゼオノズカRSを0.1%、ペクトリアーゼY-23を0.1%、マンニトールを0.5MとCPW塩を含む酵素液（pH 5.5）を用い（表1）、25℃で5時間処理した後、遠心分離により精製する。
   
3. プロトプラスト培養には、1/2MS培地を基本として、2,4-Dを1μM、BAPを1μM、ショ糖を0.5M含む液体培地（表2）を用い、22℃、暗黒下で培養して細胞分裂からカルスまでを誘導する。
   
4. 液体培地の浸透圧をショ糖のみで調整することにより、浸透圧降下のための定期的な培地添加を省略でき、培養操作を省力化できる。
   
5. プロトプラストを2～3カ月間、初代培地のまま培養して誘導した直径1mm程度のカルスを、IBAを50μM、GA3を1μM、ショ糖を30g/l含む1/2MS寒天培地に継代し、22℃、12時間日長で培養することにより植物体に再生できる（表3）。
   

成果の活用面・留意点

1. 培養中に抽苔すると順化鉢上げが困難となるため、カルスの継代培養では12時間日長を越えないようにする。
   

• カテゴリ: 省力化 播種 品種 ほうれんそう