豚小胞病ウイルス（ＳＶＤＶ）の中和エピトープの解析

• 研究期間: 1992～1992
• 研究担当者: 井上亙; 佐伯隆清; 山口成夫; 菅野徹
• 発行年度: 1993
• 要約: 中和モノクローナル抗体に対するエスケープミュータント（中和抵抗性変異株）の塩基配列の変異解析から中和エピトープ（抗原決定基）をコードする遺伝子部位を特定した。この中和エピトープはウィルスの構造蛋白サブユニットの三次元シュミレーションモデルで５ケ所に分布していることを明らかにした。
• 背景・ねらい: 豚小胞病ウイルス（SVDV）は，豚に感染して口蹄疫類似の水胞性病変を; 形成する海外伝染病の病原体で，ピコルナウイルス科に属し，その全遺伝子; の塩基配列はすでに決定されている。SVDVの中和エピトープをコードす; る遺伝子部位及びウイルス粒子上の中和エピトープの位置を明らかにする目; 的で，中和モノクローナル抗体に対するエスケープミュータントを作出し，; その遺伝子の塩基配列の変異からアミノ酸変異部位を特定することにより，; 中和エピトープの解析を行った。

成果の内容・特徴

1. 中和モノクローナル抗体８クローンを用いて作出されたエスケープミュ
   ータントウイルス２５株は，その中和抵抗性の獲得パターンから５グループ
   に分けられた
   （図１）。
   
2. 各エスケープミュータントの構造蛋白領域をコードする。DNAクロー
   ニングを行い，その塩基配列を決定した。変異は各々について１～３ケ所認
   められたが，同一モノクローナル抗体を用いて作出されたミュータントの変
   異を比較することにより１ケ所の有効なアミノ酸変異が推定された。この変
   異はすでに報告のあるポリオウイルスの中和抗原エピトープ部位（site
   １，２，３a，３b，３c）に相当するSVDVの構造蛋白部位に存在した
   が，グループ分けがポリオウイルスと一部異なっていた
   （表１）。
   
3. ポリオウイルスでX線解析による立体構造のデータを利用し，SVDV
   の３次元シュミレーションモデルを作製し，得られた成績を解析したところ
   ，全ての中和エピトープはウイルス粒子表面に位置し，それらは構造蛋白サ
   ブユニット中の５ケ所に分布していた
   （図２）。
   
4. 以上の成績から，SVDVの構造蛋白サブユニット中の５ケ所の中和エ
   ピトープのサイト名を表２のように提唱した。
   

• 成果の活用面・留意点: SVDVの中和エピトープの部位が明らかになり，野外ウイルスの中和抗原; 性の解析が可能となった。さらにこの成果は，遺伝子工学的手法を用いた本; 病ならびに口蹄疫等のワクチン開発及び診断に活用される。; 研究課題名：豚小胞病ウイルスの遺伝子の構造と機能解析; 予算区分 ：経常; 研究期間 ：平成４年度（昭和６３年度～平成４年度）; 研究担当者：菅野徹・井上亙・佐伯隆清・山口成夫; 発表論文等：; １）豚小胞病ウイルスの中和抗原コード遺伝子の解析，; 第４１回日本ウイルス学会総会演説抄録,p272(1993).
• カテゴリ: 抵抗性 豚