Random Amplified Polymorphic DNA（ＲＡＰＤ）法によるPasteurella haemolytica血清型１型菌株の遺伝子型別

• 担当機関: 家畜衛生試験場
• 研究期間: 1997～1998
• 発行年度: 1998
• 要約: Pasteurella haemolytica血清型１型菌株を８つのグループに型別するＲＡＰＤ法を確立した。
• 要約(英語): Fifty-six isolates of Pasteurella haemolytica serotype 1 (in 31 clinical respiratory diseases of cattle) were typed by random amplified polymorphic DNA (RAPD). RAPD showed high typeability and reproducibility, and yielded 8 independent patterns. This analysis is quick, simple and less labor-intensive. RAPD could be a utility tool for the epidemiological investigation of P. haemolytica serotype 1. (Lab. of Microbiological Diagnosis, Department of Systematic Diagnosis, TEL [phone])
• 背景・ねらい: Pasteurella haemolyticaは，牛呼吸器複合感染病の主要原因細菌のひとつである。本菌は，莢膜の抗原性により現在までに12種類の血清型に分類されているが，呼吸器病罹患牛からは特に血清型１に属する株の分離頻度が高い。このため，疫学解析を行うためには同一血清型をさらに区別できる方法が必要となる。; そこで，迅速且つ簡便な分子疫学手法であるRandom Amplified Polymorphic DNA（ＲＡＰＤ）法を用いて血清型１型菌株の型別を試みた。

成果の内容・特徴

1. RAPD法のプライマーとしては，PB1(ggAACTgCTA)
   が最適であった。反応液組成及び遺伝子増幅プログラムは表１及び表２に示した。
2. 各血清型標準株（１～16型）及び1987年から1997年に日本国内で分離された血清型１型野外分離株（31症例由来56株）を供試した。血清型１型供試菌株は，他の血清型標準株とは異なる泳動パターンを示した。
3. 血清型１型野外分離株は，８種類のRAPDパターン（type a～h）に分けられた(図
   1)。
4. 同一症例由来株は全て同一のRAPDパターンを示し，11症例由来株がtype aに，７症例由来株がtype
   eに，４症例由来株がtype b 及びc に，２症例由来株がtype g に，それぞれ型別された。
5. 全ての菌株についてRAPD法による型別を４回行ったが，RAPDパターンに変化は認められず再現性に問題はなかった。

成果の活用面・留意点

　 RAPD法による型別は本菌の疫学解析に利用できる。