Salmonella Typhimurium DT104が保有する溶原化ファージの性状解析

• 担当機関: （独）農業・生物系特定産業技術研究機構 動物衛生研究所
• 研究期間: 2003～2007
• 研究担当者: 横溝祐一; 鮫島俊哉; 秋庭正人; 菅野徹; 西森敬; 西森知子; 石原涼子; 中澤宗生; 田中聖; 内田郁夫
• 発行年度: 2003
• 要約: Salmonella Typhimuriumファージ型DT104に共通して存在する溶原化ファージST104を分離し、その性状解析を実施した。ST104はP22ファージに高い相同性を示した。ファージ型別の手技は煩雑であることから、当該ファージはDT104のマーカーとして有用であると考えられた。
• キーワード: Salmonella Typhimurium、DT104、溶原化ファージ、ST104
• 背景・ねらい: 近年多剤耐性Salmonella Typhimurium（S.T）ファージ型DT104の分離が国内の家畜においても報告されている。そこで、本研究においてDT104の性状解明の一環として、同菌における溶原化ファージの検索を行い、分離されたファージについて、その性状解析を実施した。
• 成果の内容・特徴: 1.; DT104 12株、およびDT104とパルスフィールド電気泳動法を用いた型別により同一遺伝子型を示す株5株（ファージ型未同定）およびそれと異なった遺伝子型を示すS.T 26株を含む計42株について、マイトマイシンC処理による溶原化ファージの誘導を試みた。このうち34株から、指示菌として用いたLT2株を溶菌するファージを分離した。; 2.; 分離されたファージからそのゲノムDNA精製し、制限酵素EcoRIによる消化実験を実施したところ、５種類のパターン(a1, a2, b, c,ｄ)が検出された（図１）。; 3.; DT104およびそれと同一の遺伝子型を示す株17株から分離されたファージの切断パターンは同一のパターン（a1）を示し、このファージをST104と命名した。; 4.; ST104のゲノムはXbaI断片（485 kb）上に位置していた（図略）。; 5.; ST104の全ゲノムDNAのシークエンスを実施した。ST104は41,391 bpからなり、64個のオープンリーディングフレーム(ORF)が検出され、このうち27個がアミノ酸配列レベルにおいてP22ファージのものと90％以上の相同性を示した（図２）。; 6.; ST104のゲノムはサルモネラや大腸菌由来の少なくとも８種のlambdoidファージ（P22、ST64T、933W、HK620、HK022、HK97、VT2-Sa、PS119）とホモロジーを示すORFが含まれ、いわゆるモザイク構造を示した（図２）。
• 成果の活用面・留意点: 1.; DT104が共通に保有する溶原化ファージの存在が明らかとなり、当該ファージはDT104のマーカーとして有用である。; 2.; ST104ゲノムDNAの塩基配列を利用して、DT104のPCRによる簡易スクリーニング法の開発が可能と考えられる。