イネキチナーゼ遺伝子を導入したイタリアンライグラス形質転換体の作出

• 担当機関: （独）農業・生物系特定産業技術研究機構 畜産草地研究所
• 研究期間: 2002～2003
• 研究担当者: 間野吉郎; 高橋 亘(日本草地畜産種子協会); 高溝 正; 佐藤広子; 西澤洋子（生物研）; 藤森雅博
• 発行年度: 2003
• 要約: パーティクルガン法によりイネキチナーゼ遺伝子をイタリアンライグラスに導入し、冠さび病に対する抵抗性が増大した組換え体を得る。
• キーワード: イネ科牧草、イタリアンライグラス、遺伝子導入、発現解析
• 背景・ねらい: イタリアンライグラスは地中海地方を原産とする寒地型イネ科牧草で、我が国では最も重要な飼料作物として東北から九州までの広範囲で栽培されているが、冠さび病等の糸状菌に対する耐病性の付与が最も重要な育種目標である。本研究ではイタリアンライグラスの耐病性を飛躍的に高めることを目的としてパーティクルガンにより溶菌活性のあるイネキチナーゼ遺伝子を導入する。
• 成果の内容・特徴: １．; イネ科での発現が強いイネアクチンプロモーターにイネから単離したキチナーゼ遺伝子（Cht-2）をつないだ遺伝子発現ベクターを構築し、パーティクルガンによりイタリアンライグラスのカルスに導入して形質転換体を作出した。; ２．; 導入されたキチナーゼ遺伝子がPCRで確認された形質転換体のうち代表的なものについてRT-PCRを行い、ｍRNAレベルでも導入遺伝子が発現していることを確認した（図1）。; ３．; 上記形質転換体について冠さび病菌接種試験を行った結果、抵抗性の増大した個体が確認できた（図2、3）。それらのうち3個体についてキチナーゼの比活性を測定した結果、非形質転換体と比較して最大で約9.2倍の比活性を示す個体が確認された（図4）。
• 成果の活用面・留意点: １．; イタリアンライグラスの耐病性育種素材として活用できる。; ２．; 他の糸状菌病に対する抵抗性も検定する必要がある。
• カテゴリ: 育種 イタリアンライグラス 寒地 飼料作物 抵抗性