チューリップ微斑モザイク症状に特異的な因子および粒子の性状と血清学的診断法

• 担当機関: 富山県農業技術センター野菜花き試験場
• 研究期間: 1996～1998
• 研究担当者: 山本孝; 守川俊幸; 築尾嘉章; 野村良邦
• 発行年度: 1996
• 要約: チューリップ微斑モザイク症状から特異的に分離される感染因子をC. quinoa上で増殖し、47Ｋのタンパク質を有するウイルス様粒子を純化した。さらに、本粒子に対する抗血清を作製して、血清学的診断法を確立した。
• キーワード: チューリップ微斑モザイク症状、47Ｋ、ウイルス様粒子、血清学的診断法富山県農業技術センター野菜花き試験場 球根類病害指定試験地
• 背景・ねらい: 県内で発生し問題となっているチューリップのウイルス様症状の病原は長らく不明である。そこで、ウイルス様症状の１つである微斑モザイク症状について、ウイルス様粒子を純化し、抗血清を作製して血清学的な診断方法を確立する。

成果の内容・特徴

1. 微斑モザイク症状の感染株から特異的に分離される感染因子の耐保存性は１～２時間(20℃)、耐熱性は40～45℃(10分間)、耐希釈性は100～500倍であり、不安定な種類のウイルスと考えられる。
   
2. 粗汁液に活性炭素や2-メルカプトエタノールなどを添加することによって耐保存性が向上し、C. quinoa上での増殖・継代が容易となる。
   
3. タンパク質分子量が47Ｋ、幅が４～８nmの複雑に屈曲したひも状ウイルス様粒子が検出される。(図１)
   
4. Western blot解析によって、本粒子抗血清と反応する47Ｋタンパク質が特異的に検出される。
   
5. 感染性は、抗ウイルス様粒子IgG、RNase A, Proteinase KやＳＤＳの処理によって失活し、抗健全成分IgGやDNase Iでは失活しない。(表１)
   
6. TBIA法(図２)やdas-ELISA法による診断法を確立したが、抗原は、茎、葉、花弁に偏在する(図３)ことから、TBIA法を用いて茎横断面から検出する方法が、最も精度の高い診断法である。
   

成果の活用面・留意点

1. 血清学的な診断法が確立され、迅速な検出診断が可能となった。ただし、das-ELISA法で診断する場合は、磨砕用緩衝液に活性炭素を添加する必要がある。
   
2. 塩化セシウム密度勾配遠心後の最終純化試料には感染性がないことから、本ウイルス様粒子がウイルスであることを完全には証明できていない。
   

• カテゴリ: チューリップ モザイク症