ウシCXCL8に対するモノクロ-ナル抗体

• 担当機関: （独）農業・食品産業技術総合研究機構 動物衛生研究所
• 研究期間: 2009～2011
• 研究担当者: 清水眞也; 広田次郎
• 発行年度: 2012
• 要約: 新たに作出したウシCXCL8に対するモノクロ-ナル抗体を用いることにより、種々の試料中のウシCXCL8の測定および、免疫染色によって組織内におけるウシCXCL8の分布の解析が可能となる。
• キーワード: ウシCXCL8、ELISA、免疫染色
• 背景・ねらい: CXCL8(別名インターロイキン8)は、炎症および免疫認識において主要な役割を担うサイトカインで、リポ多糖類等の刺激により、単球、マクロファージ、内皮系細胞および好中球などの種々の細胞で産生され、特に好中球において様々に作用する。ウシCXCL8の牛体内での活性や動態を研究するためには、抗ウシCXCL8モノクロ-ナル抗体が有用となる。そこで、抗ウシCXCL8モノクロ-ナル抗体を樹立し、これを用いたELISAによるウシCXCL8の測定系を確立する。

成果の内容・特徴

1. ウシCXCL8に対する3種類のモノクロ-ナル抗体 (SH8-8D7、SH8-12A5、SH8-2A1)を樹立する。樹立したモノクロ-ナル抗体は、免疫沈降法およびウエスタンブロットでウシCXCL8と反応している(図1)。
2. 1株(SH8-2A1)は、ウシCXCL8の中和活性を有する。
3. 樹立したモノクロ-ナル抗体の内、捕捉抗体にSH8-12A5を、検出抗体にSH8-2A1を用いることにより、ウシCXCL8を検出可能である。測定範囲は、20-1000pg/mlである(図2)。
4. ヒトCXCL8には軽度に反応しているが、他のウシサイトカインとの交叉性はない(表1)。
5. 培養上清中のウシCXCL8の測定が可能である。
6. SH8-2A1は、免疫染色に適用可能である(図3)。

成果の活用面・留意点

1. ウシCXCL8が定量可能となったことで、さまざまな疾病における、CXCL8の関与や動態が明らかとなる。
2. ウシCXCL8の免疫染色が可能となったので、ウシCXCL8の病理学的な解析で利用できる。

• 研究内容: http://www.naro.affrc.go.jp/project/results/laboratory/niah/2012/170c1_02_16.html