牛バイオプシー胚の生存性と凍結保存

• 担当機関: 東京都畜産試験場
• 研究期間: 1995～1997
• 発行年度: 1997
• 要約: 性判別のためにバイオプシーした牛体外受精胚を保存するために、培養液中にβ-メルカプトエタノールを添加し培養した結果、20時間後まで、90%前後の生存が認められた。また、培養時間による凍結融解後の生存性に差は見られなかった。
• 背景・ねらい: PCR法による胚の性判別では、胚からサンプル細胞を採取（バイオプシー）するのでバイオプシーしていない胚（Intact胚）に較べ、生存性が劣る傾向が見られる。そこで性判別胚を移植するまでの間の損耗率を下げるため、培養液中に添加する血清の種類とβ-メルカプトエタノール（β-ME）の添加効果について、体外受精胚を用いて検討した。また培養時間による受胎率の差および、凍結融解後の生存性についても比較した。

成果の内容・特徴

1. 媒精後7～8日目の体外受精胚をバイオプシーした後、 TCM-199を基礎培地とした5%子牛血清(CS)または5%牛胎児血清(FCS) にβ-ME（50μM）を添加した培地で20時間まで培養した結果、血清の種類にかかわらずβ-ME添加区では無添加区に較べ、胚胞腔の再現性が有意に高かった（表1）。
   
2. β-ME（50μM）を添加した5%FCS-199 で4～8時間および16～20時間培養した体外受精由来の性判別胚を移植したところ、それぞれ83.3%、50.0%の受胎率であった（表2）。得られた産子の性は判別結果とすべて一致していた。
   
3. バイオプシー後の胚を同様の培地で2～3時間および18～20時間培養後、1.5 Mエチレングリコールに 0.1Mシュークロースを加えた20%CS-PBSで凍結し、融解後の生存性を比較したところ、それぞれ78.0%、79.5%の胚で形態がもとに戻り、培養時間による差は見られず、バイオプシーしていない胚（80.5%）と比較しても遜色のないものであった（表3）。
   

• 成果の活用面・留意点: 性判別胚を移植するまでに長時間を要する場合、胚の保存培地中へのβ-ME添加の有効性が示唆された。また、その後の凍結においても悪影響は認められなかったことから、性判別凍結胚の移植試験に応用する予定である。