ウシ成熟卵子のガラス化保存のためのＥＧ濃度の検討と核移植への応用

• 担当機関: 兵庫農総セ
• 研究期間: 2002～2003
• 研究担当者: 大塚由佳子; 冨永敬一郎; 柴谷増博
• 発行年度: 2002
• 要約: 超急速ガラス化法であるゲル・ローディング・チップ（GL-Tip）法によるウシ成熟卵子の保存に適したガラス化液中のエチレングリコール濃度は31%であり、体外受精及び核移植を行っても、胚盤胞への発生率は新鮮卵子と差がない。
• キーワード: ウシ成熟卵子、超急速ガラス化、エチレングリコール濃度、体外受精、核移植
• 背景・ねらい: ウシ初期胚や成熟卵子の保存には凍結傷害の少ない超急速ガラス化法が最も適している。GL-Tip法は冷却速度が著しく速いため、ガラス化液中の耐凍剤濃度を通常のガラス化に用いる濃度より低下させることができる。ウシ成熟卵子の保存に適したガラス化液中の耐凍剤濃度を調査する。; ガラス化液の基礎媒液は20%子牛血清＋TCM199＋1Mスクロースとし、耐凍剤にエチレングリコール（EG）を用い、EG濃度を25%（25%区）、28%（28%区）、31%（31%区）および40%（40%区）の4区に区分して卵子をガラス化する。これらのガラス化液を用いて保存した成熟卵子を体外受精および核移植のレシピエントとして利用し、その後の発生率を調査してガラス化液の有効性を調査する。
• 成果の内容・特徴: 1.; ウシ未成熟卵子を採取後成熟培養し、極体を放出した成熟卵子をガラス化し、融解後に２時間培養して形態的な正常卵子率を調査した結果、28%区、31%区及び40%区が高い正常卵子率である（表1）。; 2.; 正常卵子に体外受精を行い、その後の発生率を調査した結果、胚盤胞発生率は、31%区で対照区である新鮮卵子と差がない（表1）。; 3.; 正常卵子に体外受精を行い、その後の発生率を調査した結果、胚盤胞発生率は、31%区で対照区である新鮮卵子と差がない（表1）。; 4.; ガラス化卵子を用いた核移植7日目胚盤胞の細胞数は、新鮮卵子よりも有意に少ない（P<0.05、図2）。
• 成果の活用面・留意点: 1.; 卵子の保存ができるため、雌牛のみの遺伝資源が確保でき、融解後様々な種雄牛との体外受精が可能である。; 2.; 核移植のレシピエント卵子にも活用できるため、計画的な核移植が実施できる。; 3.; ガラス化卵子由来の核移植胚の受胎率の調査が必要である。; <
• カテゴリ: 遺伝資源