全きょうだい家系サンプルとＲＡＰＤ法によるウシＹ染色体特異的ＤＮＡの単離

• 担当機関: 東北農業試験場
• 研究期間: 1996～1996
• 発行年度: 1996
• 要約: 全きょうだい家系のＤＮＡサンプルとＲＡＰＤ法とを組合わせた簡単な方法でウシのＹ染色体特異的（雄特異的）ＤＮＡ配列を単離できることがわかった。得られたＤＮＡ断片は胚の性判別への応用あるいは雄特異的多型マーカー探索のプローブとして活用できる。
• 背景・ねらい: ウシでは受精卵移植と胚の性判別を組み合わせて育種改良を速めようというニーズがあ; る。その判別には胚の一部を取り出し，ＰＣＲ法により雄だけが持っているＤＮＡすなわちＹ染色体特異的ＤＮＡ（以下，Ｙ特異的ＤＮＡ）の有無を調べる方法が主流になっている。すでにいくつかのウシＹ特異的ＤＮＡが知られているが，これらの利用には特許などの制約がある。また，性判別以外にも，多型性に富むＹ特異的配列か得られれば進化の系譜を雄側から追跡する手段として利用できる。Ｙ特異的ＤＮＡ配列の単離方法はいくつかあるが，多大な労力を必要とするものか多い。本研究では全きようだいサンプルを用いて簡単な方法でウシＹ特異的ＤＮＡを単離する事を目的とした。

成果の内容・特徴

1. RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA：任意の短いプライマーと緩いアニール条件によるＰＣＲで同時に複数のＤＮＡ断片を増幅する手法）を用いて，特定のゲノム領域に近接するマーカーを迅速に同定するために植物分野で開発された方法を，ウシＹ特異的ＤＮＡの単離に適用した（図１）。黒毛和種の全きようだい家系（父、母、子♂４頭、♀３頭）のＤＮＡサンプルを用い，子のＤＮＡは性別にそれぞれ混合し、父、母、子♂、子♀の４サンプルに対して２４種類のプライマー（１２－ｍｅｒ）による３００の組合せでＲＡＰＤ分析を行った。
   
2. その結果，父にあって母にはなく、子♂だけに伝達されたバンドが７本あった。これ
   らについてさらに個々の子♂および血縁関係のない♂ヘの伝達を調べたところ、少なくと
   も４つについて雄特異的な伝達か確認された（図２）。
   
3. これら４種類のＤＮＡばサザン法により雄特異的であることを確認した（図３）。さらに塩基配列を決定してデータペースを検索したが，いずれも既知の配列ではなかった。
   

成果の活用面・留意点

1. ＲＡＰＤ法で得られたＹ特異的ＤＮＡ断片については直接胚の性判別への利用，あるいはより反復度の高い配列や雄特異的多型マーカー探索のプローブとして活用できる。また，本法は他の家畜へ応用することが可能である。
   
2. サンプル数の限定される全きようだいではなく，多数のランダムな個体から単純に
   性別にプールしたサンプルを用いて，同様の効率でＹ特異的ＤＮＡが得られる可能性もあるがそれについては検討していない。
   

• カテゴリ: 育種 受精卵移植