コメットアッセイ法を用いた牛単一胚のDNA損傷の検出

• 担当機関: 畜産試験場
• 研究期間: 1999～2000
• 研究担当者: 永井 卓; 岡野 彰; 高橋ひとみ; 高橋昌志
• 発行年度: 2000
• 要約: 牛初期胚が体外培養環境からうける影響、特に酸化ストレス環境が胚発生に及ぼす影響を解析する手法であるコメットアッセイの利用により、損傷を受けたＤＮＡを単一胚から高感度に検出できる。
• 背景・ねらい: 胚の体外発育に大きく影響する要因の一つとして、酸化ストレスが挙げられる。酸化ストレスは細胞のＤＮＡに作用し、損傷を与えることが知られている。そこで、胚のＤＮＡの損傷を検出し、これを用いて胚の体外培養環境の評価が可能になると考えられる。従来、細胞のＤＮＡの断片化状態を観察する手法としては、多数の体細胞からＤＮＡを抽出した後、電気泳動を行い、断片化したＤＮＡが梯子状になった泳動パターンを検出する手法が用いられてきた。しかし、この手法を行うには多数の細胞を必要とし、ＤＮＡ抽出の手間もかかるので、初期胚のような少数の細胞を用いた極く微量のＤＮＡの断片化を調べる際には困難が伴っていた。そこで、単一初期胚のみでＤＮＡの損傷検出が可能な手法の開発を試みた。
• 成果の内容・特徴: １．; 図２）。; ２．; 図４）。
• 成果の活用面・留意点: １．; 本検出法は全ＤＮＡを検出する手法なので、ミトコンドリアＤＮＡを大量に持つ初期胚では、ゲノムＤＮＡかミトコンドリアＤＮＡ由来の損傷かが区別できない。