ウシ胚由来バイオプシー栄養膜細胞の培養方法

• 担当機関: 山形農総研セ
• 研究期間: 2003～2005
• 研究担当者: 菅和寛; 星宏良（機能性ペプ研）; 青柳和重; 千代豊（機能性ペプ研）
• 発行年度: 2005
• 要約: ウシ胚からヘルニア法によりバイオプシーした栄養膜細胞を、10％ウシ胎子血清を添加したESM-2培地で培養することにより効率的に増殖させることができる。
• キーワード: ウシ胚、栄養膜細胞、バイオプシー、培養増殖
• 背景・ねらい: 近年、遺伝病や経済形質についての遺伝子診断やマーカー解析が可能になり、胚の段階での複数項目診断も報告されている。しかし、一般的には胚から採取できる細胞数は限られるため、診断できる項目数や判定精度などの点で課題が残されている。そこで、ひとつの胚に対して高精度な多項目の遺伝子診断を可能にするDNA量を得るため、バイオプシーした栄養膜細胞を効率的に増殖させる培養方法を確立する。

成果の内容・特徴

1. ヘルニア法によるバイオプシー（図1）とウシ胎子血清を添加したESM-2培地での培養を組み合わせることにより、ウシ胚からバイオプシーした栄養膜細胞を効率的に増殖させることができる（表1）。
2. ESM-2培地に10％濃度のウシ胎子血清を添加することにより、高い生存性を維持し栄養膜細胞を増殖させることができる（表2）。
3. 栄養膜細胞は、培養により胞状を維持したまましばらく成長したのち、自然に培養プレートに定着し平面状に増殖する（図2）。

成果の活用面・留意点

1. HPM199およびESM-2培地は（株）機能性ペプチド研究所の製品である。
2. ヘルニア状の栄養膜細胞の直径が小さい場合、切断後培養しても増殖しない可能性が高いため、切断時の直径は100μm以上であることが望ましい。
3. 推定細胞数は、ヘキスト33342により染色しカウントした単位面積あたりの細胞数と増殖した栄養膜細胞の表面積から算出した。

• カテゴリ: 機能性