チャやツバキにも応用できる珪藻土を用いた植物DNAの迅速単離法

• 担当機関: （独）農業技術研究機構 野菜茶業研究所
• 研究期間: 1998～2003
• 研究担当者: 田中淳一
• 発行年度: 2001
• 要約: 珪藻土とスピンフィルターを用いて、フェノールやクロロフォルムを使わずに各種の植物から比較的高品質のDNAを短時間で抽出することができる。この方法はチャやツバキ等のDNAの抽出が困難な植物からの抽出にも使用できる。
• キーワード: DNA抽出、珪藻土、スピンフィルター、フェノール、クロロフォルム、チャ
• 背景・ねらい: DNAマーカーによる選抜の実用化のためにはDNA抽出作業を含むマーカー検出作業の効率化が不可欠である。イネ等で行われている極めて簡易なDNA抽出方法ではチャでは実用に耐え得る品質のDNAが得られない。また、ツバキ等の一部の木本性植物では、CTAB法等の一般的な方法ではDNA抽出が困難である。これはポリフェノールや多糖類等を多量に含むためと考えられる。珪藻土とスピンフィルターを用いて短時間で高品質のプラスミドDNAをバクテリアから抽出する方法が開発されている。珪藻土とスピンフィルターを用いて植物材料から短時間でマーカー検出に耐え得る品質のDNAを抽出できる方法を開発する。
• 成果の内容・特徴: 1.; 破砕した植物組織をSDS等を含む緩衝液に懸濁・抽出の後、遠心にて粗抽出液を得、酢酸カリウム等による除タンパクの後、スピンフィルター上に移してカオトロピックイオンを含む溶液を加えて混和する。これに珪藻土を懸濁してDNAを吸着させ、スピンフィルターの遠心にてエタノールを含む緩衝液を用いて洗浄の後、DNA用緩衝液で溶出する（表1、図1）。この方法により、チャ葉から比較的高品質のDNAを短時間で抽出できる。; 2.; 抽出されたDNAはPCRによるDNA多型の検出やLong-PCR、制限酵素による消化、その後のアダプターの連結等に問題なく使用することができる。
• 成果の活用面・留意点: 1.; DNA抽出が困難な植物を含む多くの植物種からのDNA抽出に利用できる（表2）。; 2.; この方法はオランダイチゴ、イヌマキ、フェイジョア、キウイフルーツには適用できない。
• カテゴリ: いちご キウイフルーツ DNAマーカー フェイジョア