HPLC分析による二枚貝の毒組成解析とELISAの有効性検証

• 担当機関: （独）水産総合研究センター 中央水産研究所
• 研究期間: 2011～2014
• 研究担当者: 鈴木敏之; 里見正隆; 松嶋良次; 渡邊龍一
• 発行年度: 2011
• 要約: マウス試験の前段階のスクリーニングにELISAを使用できるか、二枚貝に含まれる毒の組成を指標に検証した。蛍光化-HPLCにて検体を分析したところ、毒組成や毒力は年度間や定点間でよく類似しており、ELISAの測定結果を裏付けた。カキの毒化状況が例年通りであれば、ELISAを用いたスクリーニングが有効であることが明らかになった。
• 背景・ねらい: 酵素免疫測定法（ELISA）は操作の簡便性や迅速性が大きな特徴であり、貝毒検査のスクリーニング法として有用である。そこで、二種類のELISA（RIDASCREEN（R-Biopharm社製）と大阪府公衆衛生研究所で開発された測定法（PSP-ELISAと仮称））を使って、カキの毒力を調べたところ、公定法（マウス毒性試験）で得られた結果と比較的良い相関を与えた。本研究では、複数の年度および定点で採取されたカキを麻痺性貝毒の化学分析法である蛍光化-HPLCにて分析し、毒の組成変動を指標に、ELISAの有効性を検証した。

成果の内容・特徴

1. 方法
   2007-2010年にかけて、毒化が認められたカキ約50検体を調べた。分析検体は、公定法に従って抽出した後、固相抽出し、限外濾過して調製した。蛍光化-HPLCにて検体を分析し、毒組成などを指標に、二種類のELISAの有効性を調べた。
2. 結果
   2008年の2月に毒化したカキの平均毒組成は、C1/2が最も多く、以下順にGTX1-4、dcGTX2/3、STX群であった（図1）。同月の毒蓄積期から減毒期にかけて、一定の比率を保ったまま推移することが分かった（図2）。PSP-ELISA、RIDASCREENともにマウス毒性試験で毒力が明らかとなった試料検液を代替標準液として使用した。この場合、代替標準液と検液とでは毒組成が等しく、抗体とも等しい交差反応性を示したことから、公定法の結果と比較的良い相関を与えたものと考えられる。両ELISAともにHPLCの測定結果と良い相関を与えた（図3）。両ELISAは、マウス毒性試験の検出下限値以下でも十分検出でき、スクリーニング法として充分な検出感度と精度を備えていることが明らかとなった。

• 成果の活用面・留意点: ELISAの有効性が明らかになったことにより、実際にスクリーニングに利用できる見通しが立った。複数年度にわたって、公定法との並行試験や、公定法や機器分析との相関性、毒組成解析に基づくELISAデータの検証を実施しており、その他市販キットの有効性を検証する際のモデルとなりうる。
• 研究内容: http://fra-seika.fra.affrc.go.jp/~dbmngr/cgi-bin/search/search_detail.cgi?RESULT_ID=3364&YEAR=2011