マクロファージからのロイコトリエンB₄産生を抑制する乳酸菌の簡易検索法

• 担当機関: （独）農業・食品産業技術総合研究機構 畜産草地研究所
• 研究期間: 2006～2009
• 研究担当者: 木元広実; 鈴木チセ; 小林美穂; 佐々木啓介; 水町功子
• 発行年度: 2009
• 要約: 炎症反応を引き起こすロイコトリエンB₄の産生を抑制する乳酸菌の検索に使用できる。当該方法は培養細胞を用いており、動物・ヒトから採取した白血球を用いる従来法よりも簡便である。
• キーワード: プロバイオティクス、乳酸菌、抗炎症、ロイコトリエンB₄
• 背景・ねらい: ロイコトリエンB₄（LTB₄）は生体恒常性維持などの生体調節機能を持つ重要な物質であるが、過剰に生産されると炎症反応を引き起こし、炎症性腸疾患などの原因になるとされている。これまでLTB4産生を抑制する物質の検索においては、動物・ヒト（ドナー）からLTB4産生細胞を採取して行なわれてきたが、操作が煩雑であり、ドナーの状態により結果が異なる可能性が指摘されている。近年、乳酸菌による生理的効用（プロバイオティック機能）について世界的に関心が高まってきている。そこで本研究では容易に入手できる培養細胞を用い、乳酸菌を被験物質として、LTB₄産生抑制活性の簡易検索法を開発することを目的とする。

成果の内容・特徴

1. BALB/cマウス由来マクロファージJ774.1株（アメリカンタイプカルチャーコレクションTIB67、理化学研究所バイオリソースセンター J774.1）を5×10⁵/mlで播種し、10％ウシ胎児血清（FCS）-RPMI1640培地（100U/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシン、0.5μM2-メルカプトエタノール添加）で2日間培養後、乳酸菌（生菌、1mgまたは5mg/ml）を、カルシウムイオノフォアA23187（20μg/ml　エタノール）存在下で共培養し、培養2-3時間後の培養上清中のLTB₄量を測定する（図1）。
2. 汎用されている培養細胞株を用いてもマクロファージからのLTB₄産生を確認できる（図2）。カルシウムイオノフォア無添加の場合、LTB₄産生は検出されなかった。
3. 供試した乳酸菌7株について、菌株により差はあるものの5mg/ml添加では、供試したすべての乳酸菌にマクロファージからのLTB₄産生抑制活性が見られる（図2）。

成果の活用面・留意点

1. ドナーを必要としない簡便なLTB₄産生抑制活性を有する乳酸菌の検索法として利用できる。
2. 乳酸菌以外の物質についても簡便なLTB₄産生抑制活性測定法として応用が見込まれる。
3. J774.1以外の培養細胞株については、実験条件の検討が必要である。
4. 選抜された乳酸菌の抗炎症作用の実証には、生体での効果の検証が必要である。

• カテゴリ: 播種